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閱讀次數(shù)：1333 發(fā)布時(shí)間：2013/7/29 9:39:25
酸性磷酸酶重氮鹽后偶聯(lián)法： 與堿性磷酸酶相同。重氮化和偶聯(lián)反應(yīng)多在堿性溶液中和低溫條件下進(jìn)行。在酸性溶液中容易分解。所以酶作用與偶聯(lián)反應(yīng)分兩步進(jìn)行。 1）孵育液配制 磷酸—6—苯酰-2-萘鈉 25rug 蒸餾水 80ml Wapoll醋酸緩沖液（pH 5．0） 20ml 氯化鈉 2g 重氮鹽溶液配制： 堅(jiān)牢藍(lán)B鹽 50rug 蒸餾水 50ml 加碳酸氫鈉使之堿化。 2）染色程序： ①用新鮮或冷福爾馬林固定的組織進(jìn)行恒冷箱切片： ②切片人孵育液中，室溫孵育10—60分鐘（新鮮組織切片），或1～2小時(shí)（固定后組織切片）； ③新鮮組織切片用冷生理鹽水洗3次，固定后的組織切片用蒸餾水洗3次； ④放人新鮮配制的冷重氮液中，攪動(dòng)3～5分鐘； ⑤用冷生理鹽水或蒸餾水洗3次，每次5分鐘； ⑥甘油明膠封固。 3）結(jié)果：酶活性部位顯示藍(lán)色。 4）對照實(shí)驗(yàn)：與鉛法相同。
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