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人細(xì)胞周期素D1（Cyclin-D1）免疫組化試劑盒實驗操作步驟

點擊次數(shù)：12952 發(fā)布時間：2015/9/11 9:23:26

人細(xì)胞周期素D1（Cyclin-D1）免疫組化試劑盒：
該試劑盒以HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物（HRP Streptavidin Conjugate，
HRP-SA）為基礎(chǔ)，可用于檢測細(xì)胞、組織內(nèi)的特異性Cyclin-D1 抗原。該試劑盒
具有靈敏度高、特異性強、定性定位準(zhǔn)確、背景清晰。在所用的Cyclin-D1 一抗
與相應(yīng)靶抗原結(jié)合后，用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合，*后加入HRP-SA，形
成抗原—特異一抗—生物素化二抗—HRP-SA 復(fù)合物，顯微鏡下觀察成像。
人細(xì)胞周期素D1（Cyclin-D1）免疫組化試劑盒實驗步驟（建議方案）：
石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度
1.烤片：將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr；
2.脫蠟：切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；
3.水化：切片經(jīng)下行酒精水化，無水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%乙醇2 min；75%乙醇2min，自來水沖洗，ddH2O 洗2×2min；
4.抗原修復(fù)：根據(jù)抗體說明書推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù)，常采用高壓、微波（溫
度達(dá)到98~100℃）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O 洗2×
2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復(fù)方法見附1）* 注：有些抗原勿需修復(fù)，
直接進(jìn)入第5 步封閉。
5.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育30 min；
6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過夜；
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
8.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育10 min；
9.加二抗：滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育
30 min；
10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
11.封閉：滴加試劑Tween 20，37℃濕盒孵育封閉20 min；
12.加HRP-SA：滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20 nM），
37℃濕盒中孵育30 min；
13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）；
14.顯色：應(yīng)用DAB 溶液（試劑F）顯色；
15.復(fù)染：自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明；
16.封片：待組織標(biāo)本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；
17.觀察成像：顯微鏡下觀察成像。

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司